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ICS 11. 220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 17999.3—2008 代替GB/T17999.2—1999 SPF 鸡 微生物学监测 第3部分:SPF鸡 血清中和试验 SPF chicken—Microbiological surveillance- Part 3: Serum neutralization test for SPF chicken 2009-05-01实施 2008-12-31发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国 国家标准 SPF鸡微生物学监测 第3部分:SPF鸡血清中和试验 GB/T17999.3—2008 * 中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码:100045 网址www.spc.net.cn 电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销 * 开本880×1230 1/16 印张 0.75 字数14千字 2009年4月第一版 2009年4月第一次印刷 * 书号:155066:1-36491 如有印装差错 由本社发行中心调换 版权专有侵权必究 举报电话:(010)68533533 GB/T 17999.3—2008 前言 GB/T 17999《SPF鸡 微生物学监测》分为10个部分: 第1部分:SPF鸡 微生物学监测总则; 第2部分:SPF鸡 红细胞凝集抑制试验; 第3部分:SPF鸡 血清中和试验; 第4部分:SPF鸡 血清平板凝集试验; 第5部分:SPF鸡 琼脂扩散试验; 第6部分:SPF鸡 酶联免疫吸附试验; 一第7部分:SPF鸡 胚敏感试验; 第8部分:SPF鸡 鸡白沙门氏菌检验; 第9部分:SPF鸡 试管凝集试验; 第10部分:SPF鸡 间接免疫荧光试验。 本部分为GB/T17999的第3部分。 本部分修订参照OIE《陆生动物(哺乳动物、禽鸟和蜜蜂)诊断试验和疫苗手册》(第五版)中的有关 规定。 本部分代替GB/T17999.2—1999《SPF鸡血清中和试验》。 本部分与GB/T17999.2—1999相比主要变化如下: 增加了规范性附录A“试剂的配制”、资料性附录B“病毒接种技术”以及资料性附录C“鸡胚接 种病毒后的病变特征”; 在试验内容部分,增加了病毒的稀释梯度; 对不同病毒致死鸡胚的时间重新确定。 本部分附录A为规范性附录,附录B、附录C为资料性附录。 本部分由中华人民共和国农业部提出。 本部分由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本部分起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法 斯家禽有限公司。 本部分主要起草人:曲连东、刘家森、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、姜骞、司昌德、于海波、孟庆文。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为: GB/T17999.2—1999。 SG GB/T17999.3—2008 SPF鸡微生物学监测 第3部分:SPF鸡血清中和试验 1范围 GB/T17999的本部分规定了血清中和试验的技术要求。 本部分适用于对SPF鸡进行以下病毒中和抗体的检测:禽脑脊髓炎病毒(AvianEncephalomyelitis Virus)、传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus)、传染性喉气管炎病毒(InfectiousLaryngo- tracheitisVirus)、传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus)。 2原理 中和试验系指有生物活性的病毒与相应的抗体结合后,失去原有的生物活性的中和反应。中和反 应不仅有高度特异性,且具有严格的量的关系。因此可用中和试验鉴定病毒,也可用于相应抗体的定量 检测。 3试剂和器材 3.1试剂 3.1.1病毒:禽脑脊髓炎病毒VanRoekel株(CVCCAV35)、传染性支气管炎病毒H52(CVCC AV1513)、传染性法氏囊病病毒A80株(CVCVAV2321)、传染性喉气管炎病毒A96(CVCCAV200)。 3.1.2病毒稀释液:胰蛋白陈磷酸盐肉汤(见附录A)。 3.1.3青霉素/链霉素(双抗)液(见附录A)。 3.1.43%碘酊溶液 3. 1.5SPF 胚蛋。 3.2器材 3.2.1蛋钻(打孔器)。 3.2.26号针头。 3.2.37号针头。 3.2.4混合器。 3.2.5照蛋器。 4操作程序 4.1试验准备 4.1.1血清样品处理 被检血清和阳性对照血清经56℃,30min~45min灭活补体,保存于一20℃条件下备用。 4.1.2SPF胚蛋准备 4.1.3稀释病毒 4.1.3.1取灭菌试管4支~9支,每管加入稀释液4mL、青霉素/链霉素液0.5mL 4.1.3.2第1管加人病毒液0.5mL,作连续10倍稀释。各种病毒的稀释度参见表1。 1
GB-T 17999.3-2008 SPF鸡 微生物学监测 第3部分:SPF鸡 血清中和试验
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