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ICS 65.020 B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3494—2019 农业生物质原料 纤维素、半纤维素、 木质素测定 Agricultural biomass raw materials-Determination of cellulose,hemicellulose,andlignin 行业标准信息服务平台 2019-08-01发布 2019-11-01实施 中华人民共和国农业农村部 发布 品标准 NY/T 3494—2019 前 言 爷 国 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草, 本标准由农业农村部科技教育司提出并归口。 本标准起草单位:中国农业大学。 本标准主要起草人:韩鲁佳、肖卫华、刘贤、杨增玲、黄光群。 行业标准信息服务平台 1 NY/T3494—2019 农业生物质原料 纤维素、半纤维素、 木质素测定 1范围 本标准规定了农业生物质原料中纤维素和半纤维素含量测定的高效液相色谱方法,以及木质素含量 测定的紫外分光光度方法和重量方法。 本标准适用于农作物秸秆纤维素,半纤维素及木质素的测定 2规范性引用文件 PUBL 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 Q 农业生物质原料 样品制备 NY/T3492 3试剂和材料 S 除非另有说明, 听有试剂均为分析纯的试剂,色谱用水为GB6682规定 其他使用三级水。 3.1乙醇:95 仅665mL硫酸(98%缓缓注人300mL水中冷却:摇 3.3碳酸钙 3.4D纤维二糖 D)葡萄糖DC)木糖DC+)半乳糖、L阿拉伯糖DC+ 川露糖标准品:纯度》 95%。 CENTEA D 4 仪器和设备 4.1分析天平:感量 4. 2 索氏抽提器 4. 3 电热鼓风干燥 温度可控制 05±3) 4. 4 恒温水浴锅:温度可控制在( 4.5 高压蒸汽灭菌器:温度可控制在 4.6 马弗炉:可程序升温,温度可控制在(5% 4.7 耐压试管:螺纹具塞,耐压≥60p 支务平台 4.8 真空过滤器:配玻璃砂芯(G4)。 4.9 高效液相色谱仪:配示差折光检测器。 4. 10 紫外-可见分光光度计:可在320nm处测定吸光值。 4. 11 微孔过滤器:带0.22um水相微孔滤膜。 5分析步骤 5.1试样制备 按照NY/T3492的规定执行。 5.2抽提 5.2.1水抽提 NY/T3494—2019 称取2g~10g试样(精确至0.1mg)于已称重的滤纸筒中,将滤纸筒放人索氏抽提器的抽提筒内,连 接已干燥至恒重的接收瓶,由抽提器冷凝管上端加人190mL水,于电热套上加热,使水不断回流抽提(4 次/h5次/h),一般抽提6h~8h。抽提完成后,关闭加热套,将索氏抽提器冷却至室温。 5.2.2乙醇抽提 将5.2.1水抽提后的抽提筒连接已干燥至恒重的接收瓶,由抽提器冷凝管上端加人190mL乙醇,于 电热套上加热,使乙醇不断回流抽提(6次/h10次/h),一般抽提16h~24h。抽提完成后,关闭加热套, 将索氏抽提器冷却至室温。经两步抽提后的生物质试样(即不含抽提物试样)在(45士3)℃干燥箱中干燥 至恒重,称量试样质量精确至0.1mg。 5.3两步法酸水解 5.3.1埚恒重 将玻璃砂芯埚(G4)置于马弗炉中,在(575土25)℃下灼烧至恒重。将娲从马弗炉中取出后放人 干燥器冷却,称量埚质量精确至0.1mg。 5.3.2浓酸水解 称取300.0mg(精确至0.1mg)不含抽提物试样至耐压试管,每个试样做2次以上平行实验。向耐 压试管中加人3.00mL72%硫酸溶液后立即混合均匀,将耐压试管放人(30士3)℃水浴中,5min~10 min搅拌一次。恒温60min后取出,向耐压试管中加人84.00mL水,拧紧盖子混合均匀。 5.3.3糖的回收率 用于计算回收率的糖标准溶液称为糖回收标准溶液,包括D(+)葡萄糖、D(+)木糖、D(+)半乳糖、L (十)阿拉伯糖、D(十)甘露糖。糖回收标准溶液的糖浓度应该与检测试样的糖浓度接近。称量每种糖的 质量精确至0.1mg,放人耐压试管中,加入10.0mL水,再加人348μL72%硫酸溶液,拧紧盖子混匀。用 微孔过滤器过滤,分装于样品瓶中,冷冻储藏,使用时取出解冻并摇匀。 5.3.4稀酸水解 将装有试样和糖回收标准溶液的耐压试管放人高压蒸汽灭菌器中,121℃水解1h,待水解产物冷却 至室温后,通过玻璃砂芯埚(G4)过滤,用锥形瓶收集滤液约50mL,转移至具塞容器0℃~4℃储藏,于 24h内进行纤维素和半纤维素测定,6h内进行酸溶木质素的测定。 5.4测定 5.4.1酸溶木质素 使用5.3.4酸水解溶液,用紫外可见分光光度计在320nm处测量液体试样的吸光值。用水作紫外- 可见分光光度计空白,用水稀释试样至吸光值为0.7~1.0,记录稀释倍数,记录吸光值精确到0.001。 5.4.2酸不溶木质素 5.4.2.1用大于50mL的热水冲洗100mL具塞耐压试管中残留的酸不溶残渣,使残渣全部保留在玻璃 砂芯埚(G4)中,并用真空过滤器抽干。在(105士3)℃烘干玻璃砂芯埚(G4)和酸不溶残渣至恒重,记 录玻璃砂芯埚(G4)和酸不溶残渣质量,精确到0.1mg。 被灰化。升温速率控制在10℃/min,以防止试样燃烧以及强气流引起的试样机械损失。灰化结束后降温 至105℃,取出放入干燥器中冷却。称量埚和灰分质量精确到0.1mg。V 5.4.3碳水化合物 5.4.3.1色谱条件 色谱柱:聚苯乙烯二乙烯苯树脂铅型糖分析柱,配备相应除灰保护柱。 流动相:水。 流速:0.6mL/min。 柱温:80℃~85℃。 进样量:20μL。 检测器:示差折光检测器,检测器温度尽可能接近柱温箱温度。 2
NY-T 3494-2019 农业生物质原料 纤维素、半纤维素、木质素测定
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