ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2840--2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 Indirect ELISA for detection of antibodies against Porcine parvovirus 行业标准信息服务平台 2015-10-09发布 2015-12-01实施 中华人民共和国农业部 发布 ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2840--2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 Indirect ELISA for detection of antibodies against Porcine parvovirus 行业标准信息服务平台 2015-10-09发布 2015-12-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T2840—2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 1范围 本标准规定了细小病毒科细小病毒属的猪细小病毒抗体的间接ELISA检测方法。 本标准适用于猪细小病毒抗体监测以及流行病学调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 中华人民共和国农业部公告【2003】第302号兽医实验室生物安全技术管理规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件： PPV：猪细小病毒Porcineparvovirus ELISA：酶联免疫吸附试验Enzyme-linkedimmunosorbentassay OD：光密度opticaldensity r/min：转/分钟rotationsperminute 4试剂 4.1猪细小病毒VP2重组蛋白(re-VP2) 克隆猪细小病毒结构蛋白VP2抗原优势区基因，用pET-32a表达载体进行原核表达，亲和层析法 纯化重组蛋白。获得的重组蛋白浓度应≥1mg/mL，纯度应≥95%。具体过程见附录A。 4.2阳性血清对照 选取5月龄健康猪2头，用猪细小病毒疫苗按规定剂量进行免疫，间隔3周免疫2次，第二次免疫1 个月后开始采血分离血清，用血凝抑制试验测定其抗体效价。当抗体的血凝抑制效价达到1：1024时 采血分离血清，将血凝抑制效价为1：1024的阳性血清用样品稀释液（参见B.4)进行1：50稀释，即为 阳性血清对照。 4.3阴性血清对照 采集无母源抗体、未免疫猪细小病毒疫苗的健康猪血清，经血凝抑制试验检测，结果为猪细小病毒 抗体阴性，用样品稀释液（参见B.4）进行1：50稀释，即为阴性血清对照。 4.4包被液、洗涤液、封闭液、样品稀释液、酶标抗体稀释液、底物显色液、终止液配制方法分别见B.1、 B. 2、B. 3、B. 4、B. 5、B. 6、B. 7。 5器材和设备 一次性注射器、恒温培养箱、震荡混匀仪、移液器（200uL、1000μL）、多道移液器（200μL）、酶标板、 酶联免疫检测仪等。 1 NY/T2840—2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 1范围 本标准规定了细小病毒科细小病毒属的猪细小病毒抗体的间接ELISA检测方法。 本标准适用于猪细小病毒抗体监测以及流行病学调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 中华人民共和国农业部公告【2003】第302号兽医实验室生物安全技术管理规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件： PPV：猪细小病毒Porcineparvovirus ELISA：酶联免疫吸附试验Enzyme-linkedimmunosorbentassay OD：光密度opticaldensity r/min：转/分钟rotationsperminute 4试剂 4.1猪细小病毒VP2重组蛋白(re-VP2) 克隆猪细小病毒结构蛋白VP2抗原优势区基因，用pET-32a表达载体进行原核表达，亲和层析法 纯化重组蛋白。获得的重组蛋白浓度应≥1mg/mL，纯度应≥95%。具体过程见附录A。 4.2阳性血清对照 选取5月龄健康猪2头，用猪细小病毒疫苗按规定剂量进行免疫，间隔3周免疫2次，第二次免疫1 个月后开始采血分离血清，用血凝抑制试验测定其抗体效价。当抗体的血凝抑制效价达到1：1024时 采血分离血清，将血凝抑制效价为1：1024的阳性血清用样品稀释液（参见B.4)进行1：50稀释，即为 阳性血清对照。 4.3阴性血清对照 采集无母源抗体、未免疫猪细小病毒疫苗的健康猪血清，经血凝抑制试验检测，结果为猪细小病毒 抗体阴性，用样品稀释液（参见B.4）进行1：50稀释，即为阴性血清对照。 4.4包被液、洗涤液、封闭液、样品稀释液、酶标抗体稀释液、底物显色液、终止液配制方法分别见B.1、 B. 2、B. 3、B. 4、B. 5、B. 6、B. 7。 5器材和设备 一次性注射器、恒温培养箱、震荡混匀仪、移液器（200uL、1000μL）、多道移液器（200μL）、酶标板、 酶联免疫检测仪等。 1 NY/T2840—2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 1范围 本标准规定了细小病毒科细小病毒属的猪细小病毒抗体的间接ELISA检测方法。 本标准适用于猪细小病毒抗体监测以及流行病学调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 中华人民共和国农业部公告【2003】第302号兽医实验室生物安全技术管理规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件： PPV：猪细小病毒Porcineparvovirus ELISA：酶联免疫吸附试验Enzyme-linkedimmunosorbentassay OD：光密度opticaldensity r/min：转/分钟rotationsperminute 4试剂 4.1猪细小病毒VP2重组蛋白(re-VP2) 克隆猪细小病毒结构蛋白VP2抗原优势区基因，用pET-32a表达载体进行原核表达，亲和层析法 纯化重组蛋白。获得的重组蛋白浓度应≥1mg/mL，纯度应≥95%。具体过程见附录A。 4.2阳性血清对照 选取5月龄健康猪2头，用猪细小病毒疫苗按规定剂量进行免疫，间隔3周免疫2次，第二次免疫1 个月后开始采血分离血清，用血凝抑制试验测定其抗体效价。当抗体的血凝抑制效价达到1：1024时 采血分离血清，将血凝抑制效价为1：1024的阳性血清用样品稀释液（参见B.4)进行1：50稀释，即为 阳性血清对照。 4.3阴性血清对照 采集无母源抗体、未免疫猪细小病毒疫苗的健康猪血清，经血凝抑制试验检测，结果为猪细小病毒 抗体阴性，用样品稀释液（参见B.4）进行1：50稀释，即为阴性血清对照。 4.4包被液、洗涤液、封闭液、样品稀释液、酶标抗体稀释液、底物显色液、终止液配制方法分别见B.1、 B. 2、B. 3、B. 4、B. 5、B. 6、B. 7。 5器材和设备 一次性注射器、恒温培养箱、震荡混匀仪、移液器（200uL、1000μL）、多道移液器（200μL）、酶标板、 酶联免疫检测仪等。 1 NY/T2840—2015 猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法 1范围 本标准规定了细小病毒科细小病毒属的猪细小病毒抗体的间接ELISA检测方法。 本标准适用于猪细小病毒抗体监测以及流行病学调查。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 中华人民共和国农业部公告【2003】第302号兽医实验室生物安全技术管理规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件： PPV：猪细小病毒Porcineparvovirus ELISA：酶联免疫吸附试验Enzyme-linkedimmunosorbentassay OD：光密度opticaldensity r/min：转/分钟rotationsperminute 4试剂 4.1猪细小病毒VP2重组蛋白(re-VP2) 克隆猪细小病毒结构蛋白VP2抗原优势区基因，用pET-32a表达载体进行原核表达，亲和层析法 纯化重组蛋白。获得的重组蛋白浓度应≥1mg/mL，纯度应≥95%。具体过程见附录A。 4.2阳性血清对照 选取5月龄健康猪2头，用猪细小病毒疫苗按规定剂量进行免疫，间隔3周免疫2次，第二次免疫1 个月后开始采血分离血清，用血凝抑制试验测定其抗体效价。当抗体的血凝抑制效价达到1：1024时 采血分离血清，将血凝抑制效价为1：1024的阳性血清用样品稀释液（参见B.4)进行1：50稀释，即为 阳性血清对照。 4.3阴性血清对照 采集无母源抗体、未免疫猪细小病毒疫苗的健康猪